某同學(xué)在學(xué)完菊花的組織培養(yǎng)內(nèi)容之后，決定利用課余時間去實(shí)踐這項技術(shù)培養(yǎng)出美麗的菊花來美化教室的環(huán)境。 (1)制備MS固體培養(yǎng)基時，一般使用4℃保存的配制好的培養(yǎng)母液來制備。配制時應(yīng)先根據(jù)_____和_____計算各種母液的用量以及_____和_____的用量。整個過程的操作順序是：_______________。 (2)MS培養(yǎng)基含有_____多種營養(yǎng)成分。其中__________6種屬于大量元素；__________9種屬于微量元素，能源物質(zhì)是__________。由于菊花的莖段組織培養(yǎng)比較容易，所以不必加_____。 (3)將分裝好的培養(yǎng)基連同培養(yǎng)器械一起進(jìn)行_____滅菌。 (4)選取菊花的外植體，用_____的乙醇和_____的次氯酸鈉溶液來消毒，消毒時間不宜過長。 (5)接種時要特別注意，每瓶接種_____個外植體。蓋上封口膜，溫度控制在_____，并且每日用日光燈照_____。 (6)若干天后發(fā)現(xiàn)有的錐形瓶長出可愛的菊花幼苗，有的錐形瓶培養(yǎng)失敗，還長出許多雜菌菌落。試分析其可能的原因。 

 【精講精析】在配制MS固體培養(yǎng)基時，先確定培養(yǎng)基的體積，根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)計算用量，并加蒸餾水稀釋。培養(yǎng)基的成分應(yīng)包括：瓊脂(作為凝固劑)、蔗糖(作為碳源)、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1 000毫升，調(diào)節(jié)適宜的pH，分裝滅菌后備用。在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。滅菌采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。組成 生物體的元素大約有20多種，其中屬于大量元素的有N、P、K、Ca、Mg、S等，屬于微量元素的有Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co、Cl等。選取了材料以后要進(jìn)行消毒，先在70%的乙醇中浸泡10min，再放入5%的次氯酸鈉溶液中浸泡5min，然后用另一5%的次氯酸鈉溶液浸泡5min，較后在超凈臺中用無菌水清洗。利用無菌技術(shù)將外植體接種到錐形瓶中，蓋上封口膜，放在18℃～25℃的環(huán)境中培養(yǎng)，保持每天光照不少于14.5h。若外植體消毒不徹底或是培養(yǎng)基滅菌不徹底，或操作過程中混入雜菌，都會使實(shí)驗失敗，得不到植株幼苗。

  答案：(1)要配制的培養(yǎng)基的體積   各種母液的濃縮倍數(shù)  瓊脂   蔗糖   計算→稱量→融化→加母液→定容→調(diào)pH→分裝→滅菌  

  (2)20   N、P、K、Ca、Mg、S  Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co、Cl   蔗糖   植物激素 

  (3)高壓蒸汽   

  (4)體積分?jǐn)?shù)為70%   5%   

  (5)2～3    18 ℃～25 ℃   不少于14.5h   (6)外植體消毒或培養(yǎng)基滅菌不徹底,接種時無菌操作不規(guī)范。 

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